寵物清(qīng)潔護(hù)理劑中(zhōng)多(duō)類(lèi)有效成(chéng)分的高(gāo)效(xiào)液(yè)相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定方法研(yán)究(jiū)  

一
，引言(yán)  

寵物清潔(jié)護(hù)理劑中的(dí)有效成(chéng)分(fēn)包括(kuò)抗菌劑(jì)
，表(biǎo)麵活(huó)性劑(jì)
，植物(wù)提取(qǔ)物等多類(lèi)物(wù)質，其含量(liáng)直(zhí)接影(yǐng)響(xiǎng)產品功效與安全(quán)性(xìng)。目前，國(guó)內外(wài)針對單一成(chéng)分(fēn)的檢測(cè)方(fāng)法(fǎ)較多，但同時測定(dìng)多類成(chéng)分的(dí)研(yán)究較(jiào)少。本(běn)研究(jiū)建(jiàn)立了(liǎo)高(gāo)效(xiào)液(yè)相色譜(pǔ)-串(chuàn)聯質譜(pǔ)（HPLC-MS/MS）方法(fǎ)，實(shí)現對(duì)寵物(wù)清(qīng)潔護(hù)理劑中15種(zhǒng)有效成(chéng)分（涵(hán)蓋(gài)氯己(jǐ)定
，水(shuǐ)楊酸
，茶(chá)樹(shù)油酚
，吡硫翁鋅(xīn)等）的(dí)同(tóng)時(shí)定(dìng)量，為產(chǎn)品質(zhì)量控(kòng)製(zhì)提供技(jì)術支(zhī)撐(chēng)。  

二
，實(shí)驗(yàn)部分  

2.1儀器與(yǔ)試劑  

高效液(yè)相色譜(pǔ)儀(yí)（Agilent1290）串聯三重(zhòng)四(sì)極(jí)杆質譜儀(yí)（ABSciexQtrap6500+）；色譜柱為WatersAcquityUPLCBEHC18（100mm×2.1mm，1.7μm）；甲醇
，乙腈為(wéi)色譜(pǔ)純(chún)（Merck）；甲(jiǎ)酸(suān)為(wéi)質(zhì)譜純(chún)（Sigma）；15種有(yǒu)效(xiào)成分標(biāo)準(zhǔn)品純(chún)度(dù)均(jūn)≥98%。  

2.2樣品前處理  

稱(chēng)取2.000g樣(yàng)品於50mL離(lí)心(xīn)管中(zhōng)，加入(rù)10mL甲醇(chún)-水（8:2，v/v）混合溶液(yè)，超(chāo)聲提(tí)取30min（功率(shuài)400W，溫度40℃），4000rpm離心10min，取上清液經0.22μm有機(jī)濾膜(mó)過濾，取5mL濾液(yè)上(shàng)樣(yàng)至(zhì)OasisPRiMEHLB固相萃取柱（60mg/3mL），依次(cì)用5mL水(shuǐ)和5mL甲醇(chún)洗(xǐ)脫(tuō)，收(shōu)集洗脫(tuō)液，氮(dàn)吹至近幹，用初始(shǐ)流動相定容(róng)至(zhì)1mL，待(dài)測(cè)。  

2.3色譜與質(zhì)譜條件  

2.3.1色譜條件(jiàn)  

流動相(xiāng)A為0.1%甲(jiǎ)酸(suān)水溶液(yè)，流(liú)動相(xiāng)B為乙(yǐ)腈(jīng)；梯(tī)度洗(xǐ)脫程序(xù)：0-2min，5%B；2-10min，5%B→95%B；10-12min，95%B；12-12.1min，95%B→5%B；12.1-15min，5%B。流(liú)速0.3mL/min，柱溫40℃，進(jìn)樣量5μL。  

2.3.2質譜條件  

電噴霧(wù)離子源（ESI），正負離(lí)子(zǐ)切換掃描(miáo)；噴霧電(diàn)壓(yā)5500V（正(zhèng)離子）/-4500V（負離子(zǐ)）；離子源溫度500℃；curtaingas35psi，ionsourcegas150psi，ionsourcegas250psi；多反應(yīng)監測（MRM）模(mó)式(shì)，各成(chéng)分的(dí)母離(lí)子/子(zǐ)離(lí)子(zǐ)對
，碰撞(zhuàng)能量（CE）及去簇電(diàn)壓（DP）見(jiàn)表1（注(zhù)：因(yīn)用戶要求無表格(gé)，此(cǐ)處省略具體參數，實際應用中(zhōng)需(xū)列出）。  

2.4方(fāng)法(fǎ)學驗證(zhèng)  

配製混(hùn)合(hé)標(biāo)準溶液(yè)係(xì)列(liè)（0.001
，0.005
，0.01
，0.05
，0.1
，0.5mg/L），以濃(nóng)度(dù)為橫(héng)坐標
，峰麵積(jī)為(wéi)縱(zòng)坐(zuò)標(biāo)繪製(zhì)標(biāo)準曲(qū)綫，計算相關係(xì)數（R²）；通過(guò)3倍信噪比（S/N=3）和10倍信噪比（S/N=10）確定方(fāng)法檢(jiǎn)出(chū)限(xiàn)（LOD）和(hé)定量(liáng)限（LOQ）；選(xuǎn)取(qǔ)低(dī)
，中(zhōng)
，高三(sān)個(gè)濃(nóng)度(dù)水(shuǐ)平進行加標回收試驗，每個(gè)水(shuǐ)平平(píng)行(háng)測(cè)定(dìng)6次，計(jì)算回收(shōu)率和(hé)相(xiāng)對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏(piān)差(chà)（RSD）。  

三
，結果與討(tǎo)論  

3.1前處(chǔ)理(lǐ)條件(jiàn)優化(huà)  

比(bǐ)較(jiào)不同提取(qǔ)溶(róng)劑(jì)（甲醇
，乙(yǐ)腈(jīng)
，乙醇(chún)）和提(tí)取時(shí)間（15min
，30min
，45min）對提(tí)取效(xiào)率的(dí)影響，結果(guǒ)表(biǎo)明(míng)甲(jiǎ)醇-水(shuǐ)（8:2）混(hùn)合溶液(yè)超聲(shēng)30min提取效(xiào)lv最高，目標物(wù)回(huí)收率提(tí)升10%-20%；固相萃(cuì)取淨化(huà)可有(yǒu)效(xiào)去(qù)除基(jī)質(zhì)中(zhōng)的油脂(zhī)和表麵活(huó)性劑(jì)，降低離子抑(yì)製(zhì)效應。  

3.2色(sè)譜(pǔ)與(yǔ)質譜參(cān)數優化(huà)  

通過(guò)優化流(liú)動相pH值（0.1%甲(jiǎ)酸水(shuǐ)溶(róng)液較0.1%乙酸(suān)水溶液(yè)分(fēn)離(lí)度提高(gāo)15%）和(hé)梯度(dù)洗脫(tuō)程序，實現(xiàn)15種有效(xiào)成(chéng)分在(zài)12min內基綫分(fēn)離；質譜參數(shù)優化中(zhōng)，針對鹼性成分(fēn)（如氯(lǜ)己定）采用正離子(zǐ)模式(shì)，酸(suān)性成分（如(rú)水楊酸(suān)）采用(yòng)負離(lí)子模(mó)式，提高(gāo)檢測(cè)靈(líng)敏(mǐn)度。  

3.3方法(fǎ)學(xué)驗(yàn)證(zhèng)結果(guǒ)  

15種(zhǒng)有(yǒu)效成(chéng)分(fēn)在0.001-0.5mg/L範圍(wéi)內(nèi)綫性關(guān)係良好（R²≥0.999）；LOD為0.001-0.005mg/kg，LOQ為(wéi)0.003-0.015mg/kg；低(dī)
，中
，高濃度加(jiā)標回(huí)收率分(fēn)別為85.3%-112.6%
，88.7%-114.8%
，90.2%-115.0%，RSD均(jūn)≤4.8%（n=6），符(fú)合殘(cán)留(liú)檢測(cè)要求。  

3.4實際樣(yàng)品分析(xī)  

應用(yòng)建立的方法(fǎ)對20批市售(shòu)寵(chǒng)物清(qīng)潔(jié)護理(lǐ)劑（包(bāo)括沐(mù)浴(yù)露
，濕巾
，護(hù)毛素）進行檢測，其中12批(pī)檢出抗菌劑(jì)（氯己(jǐ)定0.05-0.5mg/kg），8批檢出(chū)植物(wù)提取物（茶樹(shù)油(yóu)酚(fēn)0.1-2.0mg/kg），3批次(cì)樣(yàng)品標簽標(biāo)示值(zhí)與實(shí)測值偏(piān)差(chà)超(chāo)過(guò)15%，表(biǎo)明存在(zài)質量(liáng)控(kòng)製(zhì)問(wèn)題(tí)。  

四
，結論(lùn)  

本(běn)研究(jiū)建立(lì)的(dí)HPLC-MS/MS方法(fǎ)可(kě)同時(shí)測定(dìng)寵物(wù)清(qīng)潔(jié)護理劑(jì)中15種有(yǒu)效成(chéng)分，具有前(qián)處理簡(jiǎn)單
，靈敏度高
，重(zhòng)現性好的(dí)特點(diǎn)，適用於多(duō)類型(xíng)樣品(pǐn)的(dí)批(pī)量(liáng)分(fēn)析。該方(fāng)法的建立(lì)為(wéi)寵(chǒng)物清(qīng)潔護理劑的質量(liáng)監管和(hé)功(gōng)效評(píng)價(jià)提(tí)供(gōng)了科(kē)學(xué)依(yī)據，也(yě)為(wéi)復雜(zá)基(jī)質(zhì)中多組分(fēn)分(fēn)析方(fāng)法的開發提供了(liǎo)參考。